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ELISA試驗測定所需試劑器材
  • 發布日期:2024-05-06      瀏覽次數:651
    •   ELISA是酶聯接免疫吸附劑測定(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay)的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術之后發展起來的一種免疫酶技術。由于抗原、抗體的反應在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行,每加入一種試劑孵育后,可通過洗滌除去多余的游離反應物,從而保證試驗結果的特異性與穩定性。在實際應用中,通過不同的設計,具體的方法步驟可有多種。
       
        1. 試劑
       
        (1) 包被緩沖液(PH9.60.05M碳酸鹽緩沖液):NaCO31.59克 NaHCO3 2.93克  加蒸餾水至1000ml
       
        (2) 洗滌緩沖液(PH7.4PBS):0.15M KH2PO40.2克 Na2HPO4·12H2O 2.9克 NaCl8.0克KCl0.2克Tween-200.05%0.5ml加蒸餾水至1000ml
       
        (3) 稀釋液:牛血清白蛋白(BSA)0.1克 加洗滌緩沖液至100ml 或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5~10%使用。
       
        (4) 終止液(2MH2SO4):蒸餾水178.3ml,逐滴加入濃硫酸(98%)21.7ml。
       
        (5) 底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸):0.2MNa2HPO4(28.4克/L)25.7ml 0.1M檸檬酸(19.2克/L)24.3ml 加蒸餾水50ml。
       
        (6) TMB(四甲基聯苯胺)使用液:TMB(10mg/5ml無水乙醇)0.5ml底物緩沖液(PH5.5)10ml0.75%H2O232μl
       
        (7) ABTS使用液:ABTS 0.5mg 底物緩沖液(PH5.5)1ml 3%H2O2 2μl
       
        (8) 抗原、抗體和酶標記抗體。
       
        (9) 正常人血清和陽性對照血清。
       
        2. 器材:
       
        (1) 聚苯乙烯塑料板(簡稱酶標板)40孔或96孔,ELISA檢測儀,50μl及100μl加樣器,塑料滴頭,小毛巾,洗滌瓶。
       
        (2) 小燒杯、玻璃棒、試管、吸管和量筒等。
       
        (3) 4℃冰箱,37℃孵育箱。
       
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